試劑耗材及設備:磁力分選器,磁柱,CD15磁珠試劑盒,磁珠分選緩沖液50ml,RP1640,1ml槍及槍頭,20微升槍與槍頭,蜀科低速離心機,15ml離心管4支,細胞計數板。
步驟:
1.制冰,保證磁力分選器可以放入冰盒內操作,在4-8℃內進行分選;2.配液磁珠分選緩沖液(50ml?PBS液中含2mmol/L?EDTA,0.5%BSA,PH=7.2);3.將上步初步分選的中性粒細胞懸液用蜀科低速離心機300g離心10分鍾,去上清;4.細胞重懸于磁珠分選緩沖液中,107細胞重懸于80微升緩沖液中;(如細胞數多按倍數增加)5.107細胞中加入20微升CD15磁珠;充分混勻放入2-8℃避光孵育15分鍾;6.用1-2ml緩沖液洗滌細胞/107細胞,再次用蜀科低速離心機300g離心10分鍾,去上清;7.重懸細胞于緩沖液中,108細胞重懸于500微升緩沖液中;8.將磁力分選器置于冰盒中,用3ml緩沖液沖洗磁柱;9.將含有中性粒細胞的緩沖液加入磁柱中;10.用緩沖液沖洗磁柱,每次3ml,沖洗3次;11.除去磁場,把磁柱放置于15ml離心管上,用5ml緩沖液加壓快速沖洗磁柱;12.離心管中收集的便是中性粒細胞;13.最後用蜀科低速離心機300g離心去上清,重懸細胞于10ml細胞培養液中,細胞計數。
- 上一篇:PRP美容過程
- 下一篇:離心機中隔環損壞了怎麽辦